Enzim bağlı immünosorbent deneyi (ELISA) (/ ɪˈlaɪzə /, / ˌiːˈlaɪzə /), ilk olarak 1978 yılında Weiland tarafından tarif edilen, yaygın olarak kullanılan bir analitik biyokimya deneyidir. Deney, ölçülecek proteine karşı yöneltilmiş antikorlar kullanılarak bir sıvı numunede bir ligandın (yaygın olarak bir protein) varlığını tespit etmek için bir katı-faz enzim immüno-tahlili (EIA) kullanır. ELISA, tıp ve bitki patolojisinde bir teşhis aracı ve çeşitli endüstrilerde bir kalite kontrol kontrolü olarak kullanılmıştır.
Bir ELISA’nın en basit formunda, numuneden alınan antijenler bir yüzeye eklenir. Daha sonra, yüzey üzerine eşleşen bir antikor uygulanır, böylece antijene bağlanabilir. Bu antikor bir enzime bağlanır ve son adımda enzimin substratını içeren bir madde eklenir. Takip eden reaksiyon, en yaygın olarak substratta bir renk değişikliği olan saptanabilir bir sinyal üretir.
Bir ELISA’nın gerçekleştirilmesi, belirli bir antijen için spesifikliği olan en az bir antikor içerir. Bilinmeyen miktarda antijen içeren numune, spesifik olmayan bir şekilde (yüzeye adsorpsiyon yoluyla) veya spesifik olarak (aynı antijene özgü başka bir antikor tarafından yakalanarak, bir “sandviç” içerisinde katı bir destek (genellikle bir polistiren mikrotiter plakası) üzerinde immobilize edilir. “ELISA). Antijen immobilize edildikten sonra, antijen ile bir kompleks oluşturan tespit antikoru ilave edilir. Tespit antikoru bir enzime kovalent olarak bağlanabilir veya biyo-konjügasyon yoluyla bir enzime bağlanan ikincil bir antikor tarafından tespit edilebilir. Her adım arasında, plaka tipik olarak spesifik olmayan şekilde bağlanmış olan proteinleri veya antikorları çıkarmak için yumuşak bir deterjan çözeltisi ile yıkanır. Son yıkama aşamasından sonra, plaka, numunedeki antijen miktarını gösteren görünür bir sinyal üretmek için enzimatik bir substrat ilave edilerek geliştirilir.
Not olarak, ELISA, kesinlikle “immüno” tahlilleri yerine başka ligand bağlanma tahlilleri gerçekleştirebilir, bununla birlikte, adı, bu yöntemin yaygın kullanımı ve tarihçesi nedeniyle orijinal “immüno” u taşıdı. Teknik esas olarak katı fazda hareketsiz hale getirilebilecek herhangi bir bağlama reaktifi ile birlikte spesifik olarak bağlanacak olan bir tespit reaktifi ve uygun bir şekilde ölçülebilen bir sinyal üretmek için bir enzim kullanmasını gerektirir. Yıkamalar arasında, sadece ligand ve spesifik bağlanma muadilleri, spesifik olmayan veya bağlanmamış bileşenler uzaklaştırılırken, katı faza antijen-antikor etkileşimleri ile spesifik olarak bağlanmış veya “immünosorbe” kalır. Aynı reaksiyon kuyusunun (örneğin bir küvetin) yıkandıktan sonra tekrar kullanılabildiği diğer spektrofotometrik ıslak laboratuvar deney formatlarının aksine, ELISA plakaları, plakanın bir parçası olan katı faz üzerinde immünosorbe olan reaksiyon ürünlerine sahiptir ve bu nedenle kolayca tekrar kullanılamazlar.
Ters ELISA
Dördüncü bir ELISA testi geleneksel kuyuları kullanmaz. Bu test, test sıvısında asılı antijenleri bırakır.
Etiketlenmemiş antikor, antijeninin varlığında inkübe edilir (örnek)
Antikorların antijenlere bağlanmasına izin vermek için yeterli bir inkübasyon süresi sağlanmıştır.
Örnek daha sonra Scavenger kabından geçirilir. Bu bir test tüpü veya kanal boyunca özel olarak tasarlanmış bir akış olabilir. Scavenger kabının veya kanalının yüzeyinde kendisine bağlı “Scavenger Antijenleri” var. Bunlar, serbest antikorların bağlayacağı primer antijenlerle aynı veya yeterince benzer olabilir.
Scavenger konteyneri, Scavenger Antijenlerinin numuneye eklenen tüm fazla Antikorlara bağlanmasına izin vermek için yeterli yüzey alanına ve yeterli zamana sahip olmalıdır.
Şimdi etiketli ve bağlı antikorları içeren numune bir detektörden geçirilir. Bu cihaz bir akış sitometresi veya etiketleri aydınlatan ve cevabı kaydeden başka bir cihaz olabilir.
Bu test, aynı anda birden fazla antijenin etiketlenip sayılmasını sağlar. Bu, spesifik bakteri suşlarının iki (veya daha fazla) farklı renk etiketi ile tanımlanmasını sağlar. Her iki etiket de bir hücrede mevcutsa, hücre bu belirli türdendir. Sadece bir tane varsa, öyle değil.
Bu test, genellikle bir seferde bir test yapılır ve mikrotitre plakası ile yapılamaz. İhtiyaç duyulan ekipman genellikle daha az karmaşıktır ve sahada kullanılabilir.
Dördüncü bir ELISA testi geleneksel kuyuları kullanmaz. Bu test, test sıvısında asılı antijenleri bırakır.
Etiketlenmemiş antikor, antijeninin varlığında inkübe edilir (örnek)
Antikorların antijenlere bağlanmasına izin vermek için yeterli bir inkübasyon süresi sağlanmıştır.
Örnek daha sonra Scavenger kabından geçirilir. Bu bir test tüpü veya kanal boyunca özel olarak tasarlanmış bir akış olabilir. Scavenger kabının veya kanalının yüzeyinde kendisine bağlı “Scavenger Antijenleri” var. Bunlar, serbest antikorların bağlayacağı primer antijenlerle aynı veya yeterince benzer olabilir.
Scavenger konteyneri, Scavenger Antijenlerinin numuneye eklenen tüm fazla Antikorlara bağlanmasına izin vermek için yeterli yüzey alanına ve yeterli zamana sahip olmalıdır.
Şimdi etiketli ve bağlı antikorları içeren numune bir detektörden geçirilir. Bu cihaz bir akış sitometresi veya etiketleri aydınlatan ve cevabı kaydeden başka bir cihaz olabilir.
Bu test, aynı anda birden fazla antijenin etiketlenip sayılmasını sağlar. Bu, spesifik bakteri suşlarının iki (veya daha fazla) farklı renk etiketi ile tanımlanmasını sağlar. Her iki etiket de bir hücrede mevcutsa, hücre bu belirli türdendir. Sadece bir tane varsa, öyle değil.
Bu test, genellikle bir seferde bir test yapılır ve mikrotitre plakası ile yapılamaz. İhtiyaç duyulan ekipman genellikle daha az karmaşıktır ve sahada kullanılabilir.